先下載 primer3 和 misa 相關(guān)文件

# 下載 primer3 conda search primer3 conda install -y primer3 # misa 相關(guān)的文件下載百度云里面的，其他網(wǎng)站的好像都不能用，自己改了一下之前的腳本可以正常運行

misa 相關(guān)文件放在百度云鏈接：https://pan.baidu.com/s/1C4eU30yyLr7iNGiuGEmPtg
提取碼：dypg
文件包括misa.ini(參數(shù)設(shè)置), misa.pl(perl腳本)，p3_in.pl，p3_out.pl

misa.ini為SSR鑒定參數(shù)，默認：
definition(unit_size,min_repeats):1-10 2-6 3-5 4-5 5-5 6-5
interruptions(max_difference_for_2_SSRs):100
參數(shù)說明：1個堿基重復10次及10次以上；2個堿基重復6次及6次以上；3個堿基重復5次及5次以上；4個堿基重復5次及5次以上；5個堿基重復5次及5次以上；6堿基重復5次及5次以上的堿基重復序列算是微衛(wèi)星序列。兩個微衛(wèi)星之間的距離小于100bp的時候，兩個微衛(wèi)星組成一個復合微衛(wèi)星。

perl misa.pl test.fa perl p3_in.pl test.fa.misa ##### primer3 設(shè)計引物 primer3_core -- default_version=1 -- output=test.fa.p3out test.fa.p3in #### p3_out.pl 整理合并文件 perl p3_out.pl test.fa.p3out test.fa.misa

一對好引物的特征
1.GC含量 40-60%
2.退火溫度 50-65℃
3.3'端最后5個堿基有G或C,但是不超過3個
4.引物長度推薦 17-28bp，最好不超過 30bp

一般而言，單堿基，四，五，六堿基的引物都不用，使用的一般是二堿基重復次數(shù)10次以上，三堿基重復次數(shù)6次以上的SSR

總結(jié)

以上是生活随笔為你收集整理的SSR (misa + primer3 ) 设计SSR引物的全部內(nèi)容，希望文章能夠幫你解決所遇到的問題。

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