ELISA標準曲線的繪制方法

許多試劑檢測都涉及到標準曲線的問題，究竟如何繪制或制作標準曲線呢？

用Excell和SPSS的軟件能做出來嗎？，怎么操作？能一起求出計算公式嗎？

有沒有專門的軟件來處理呢？介紹幾種？

希望有這方面經驗的介紹自己的經歷，與大家分享，“與眾同樂才是真的快了”

的確，標準曲線做的好與壞會直接影響到實驗的結果，甚至是關系到實驗的成敗。

首先，做標準曲線樣品檢測時有幾個問題需要注意：

1、樣品的濃度等指標是根據標準曲線計算出來的，所以首先要把做標準曲線看作是比做正式實驗還要重要的一件事，否則后面的實驗結果無從談起。

2、設置標準曲線樣品的標準濃度范圍要有一個比較大的跨度，并且要能涵蓋你所要檢測實驗樣品的濃度，即樣品的濃度要在標準曲線濃度范圍之內，包括上限和下限。而對于呈S型的標準曲線，盡量要使實驗樣品的濃度在中間坡度最陡段，即曲線幾乎成直線的范圍內。

3、最好采用倍比稀釋法配制標準曲線中的標準樣品濃度，這樣就能夠保證標準樣品的濃度不會出現較大的偏離。

4、檢測標準樣品時，應按濃度遞增順序進行，以減少高濃度對低濃度的影響，提高準確性。

5、標準曲線的樣品數一般為7個點，但至少要保證有5個點。

6、做出的標準曲線相關系數因實驗要求不同而有所變動，但一般來說，相關系數R至少要大于0.98，對于有些實驗，至少要0.99甚至是0.999.

怎樣繪制標準曲線？

標準曲線濃度得到后，可通過計算器、Excell或SPSS統計軟件進行繪制，并得到相關的回歸方程(即計算公式)和相關系數(回歸系數)，個人認為，Excell軟件比較好用一些；SPSS也行，不過是英文的，初學者不是很容易掌握；計算器嘛太麻煩了，所以現在一般不用。

雙抗夾心法ELISA 擬和曲線：

擬和曲線：

打開EXCEL軟件；在工作表中

輸入第一行： 濃度值， 如0 10 50 100 400

輸入第二行：該濃度下的調整後的od值，如0 0.586 1.397 1.997 3.42

選擇這些輸入的數據，用插入里的圖表按鈕，進入圖表向導，在“標準類型”中選擇“xy散點圖”；在“子圖表類型”中選擇“折線散點圖”，按“下一步”；選擇“系列產生在行”，按“下一步”；數據標志，可以填寫：如數據y軸，OD值；數據x軸，濃度；按下一步，點擊完成?？傻们€圖。

單擊曲線，按右鍵，選擇“添加趨勢線”，在類型中，選擇多項式；在選項中，選擇顯示公式，選擇顯示R平方值。得到公式和R平方值。

也可以用上面說的方法，在公司已經提供的圖表上， 雙擊圖表，把它輸入到圖表的數據中，就可以擬和新的曲線。

計算濃度：

舉例：第一次實驗：

標準曲線為：

y = -4E-05x2 + 0.026x+0.1

R2 = 0.9745 為例，已知OD值，計算濃度。

由于y = -4E-05x2 + 0.026x+0.1，所以可以得到：

4E-05x2 －0.026x ＋(y-0.1)＝0

ax2 ＋bx ＋C＝0

a＝4E-05；b＝ －0.026； C= y-0.1

x＝(－b－(b*b－4a(y-0.1))(平方根)) /(2*a)

代入a，b，和y值，得

x＝(0.026－(0.026*0.026-0.00016*(y-0.1))(平方根))/(2*0.00004)

在excel里可以用以下公式表示：

x＝(0.026-EXP(LN(0.026*0.026-0.00016*(y-0.1))/2))/(2*0.00004)

通用公式為： Y=ax2 ＋bx ＋C

x＝(－b－EXP(LN(b*b－4a(y-c))/2))/(2*a)

您可以應用excel的公式拷貝功能，計算所有濃度。

簡化方法

如果有示例的excel表格，過程可參照附件的EXCEL表格，您的新數據可以這樣擬和：雙擊圖表，把它輸入到圖表的數據中，就可以擬和曲線。

根據曲線方程序，更改公式的參數，計算出濃度。

競爭法擬和曲線 －－－－Logit-log 直線回歸

競爭法一般情況下用Logit-log 直線回歸的方法可以擬和成近似一條直線；

令 p = OD/OD0, q = 1 - p,

y = ln (p / q), x = lg (濃度),

其中: OD 為反應值,

OD0 為濃度為 0 的反應值的均值,

則方程為:

y = a + b*x

總結

以上是生活随笔為你收集整理的elisa标准曲线怎么做_ELISA标准曲线的绘制方法的全部內容，希望文章能夠幫你解決所遇到的問題。

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