常见荧光定量 PCR 检测方法比较
以參照物為標準,對 PCR 終產物進行分析或對 PC R過程進行監測,從而達到評估樣本中靶基因的拷貝數,稱為定量 PCR。定量 PCR 的可行性定量一般是在 PCR 擴增的指數期進行的。下面我們來看一下幾種常見熒光定量 PCR 檢測方法。
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1SYBR Green I ?檢測模式
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SYBR Green I 是一種能與雙鏈 DNA 結合發光的熒光染料。其與雙鏈 DNA 結合后, 熒光大大增強。因此, SYBR Green I ?的熒光信號強度與雙鏈 DNA 的數量相關,可以根據熒光信號檢測出 PCR 體系存在的雙鏈 DNA 數量。SYBR Green I ?的最大吸收波長約為 497 nm,發射波長最大約為 520 nm。PCR 擴增程序一般為 94℃~55℃~72℃三步法,40 個循環。SYBR Green I 的缺點:由于 SYBR Green I 沒有特異性,不能識別特定的雙鏈,只要是雙鏈就會結合發光,對 PCR 反應中的非特異性擴增或引物二聚體也會產生熒光,通常本底較高,所以在臨床上使用可能會有假陽性發生。
SYBR Green I ?的優點:SYBR Green I ?的優點是因為其缺點產生,由于它能所有的雙鏈 DNA 相結合,所以對不同模板不需特別定制不同的特異性探針,通用性較好,并且價格相對較低。這對科研是很有利的,因此國內外在科研中使用比較普遍。
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2水解探針模式( Taqman 探針)
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總結
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