测序成本主要由那几方面因素决定呢?
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测序成本主要由那几方面因素决定呢?
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現在測序有好幾代測序,包括第一代測序、第二代測序、第三代測序。從測序儀上講:第一代的測序方法,主要是sanger測序,準確性高,測序長度好(1K以上),但是測序通量低,而且價格昂貴。第二代測序儀,主要有illumina的,solid和454幾個常用的測序平臺。第二代測序儀最大的有點就是價格便宜,通量非常高,準確性99%。 但是illumina主要的問題是測序長度短,100bp以上錯誤率就會大大提高。另外兩個可以更長,但是成本也略比illumina高。短序列的reads在做基因組裝的時候,遇到大的重復片段就會很麻煩。第三代的測序儀,即所謂的單分子測序,可以測的長度很高,但是會引入第二代測序很少出現的indel(插入,缺失)的情況。這三代測序基本特點是:一代:通量太低,要拿到足夠的數據就非常費錢。一代的Sanger測序的讀長比較長(可以有七八百),而且比較方便測簡單樣品。缺點是單位價格高,而且樣品必須是單一的。如果不是,你就得通過克隆文庫一類的手段把樣品弄成單一的。這成本和人力就高了去了。二代:通量大,特別是Hiseq,一個lane跑下去估計夠一代的跑好幾個月甚至一年,所以相對來說成本低很多;但是讀段太短,要拼長很困難,所以瓶頸主要在拼接組裝的算法上,因為拼接往往比測序要費時費力的多。二代里面,454前幾個月死掉了。illumina用的較多,現在可以雙端150或者犧牲通量達到雙端250,已經快達到了454的長度。現在illumina用得最多,在基因組、轉錄組等領域都有用。缺點是有的時候單個樣品的測序通量嫌高,barcode不夠用,不能用更多樣品分攤通量。三代現在貌似還不成熟,聽說錯誤率比較高。
總結
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