什么是人类基因克隆?主要策略是什么?
生活随笔
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什么是人类基因克隆?主要策略是什么?
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補充一點:定位克隆策略 :其基本思路是通過連鎖分析(linkage analysis)原理進行基因定位。若多態標記與待定基因距離較遠,則它們在向子代傳遞時會發生自由分離,呈“連鎖平衡”;反之,則不發生自由分離,而呈現“共分離(co segregation)”現象,即“連鎖不平衡”。據此可在染色體上定位與某一DNA 標記相連鎖的基因。兩基因間連鎖程度以遺傳距離表示:1厘摩(cM)=1%重組率,即1000kb。DNA 標記的選擇經歷了從致病基因→ABO、HLA多態位點→RFLP→微衛星DNA 的發展過程。微衛星DNA (microsatellite DNA ),是一種遍布于真核的短重復序列、長度2~10bp之間、按孟德爾方式遺傳、呈高度多態,能進行PCR擴增。除DNA 標記的進展外,基因定位也得益于連鎖分析方法和理論的改進,目前主要有:家系連鎖分析、等位基因共占法及人群相關性分析等。
人類基因克隆即基因通過DNA復制及細胞分裂把遺傳信息傳遞給下一代,并通過控制蛋白質的合成使遺傳信息得到表達。 目前人類基因克隆的主要策略有三種:一是反向遺傳學定位克隆 策略,它通過RFLP、微衛星DNA 等遺傳標記,先獲得某一表型基因在染色體上的定位,再在候選區域內選擇已知基因,進行致病突變的篩選,并獲得cDNA 及全基因;另一類是從蛋白質功能著手的功能克隆策略,采用以消減雜交為策略的多種分子生物學手段,先通過消減獲得特異表達或缺失的基因片段,然后進行染色體定位乃至獲得全基因。此外,尚有介于兩者之間的候選克隆 策略,包括定位候選克隆和功能候選,前者是在將疾病基因以連鎖分析和染色體分析基本定位以后,再在候選區域內選擇所有已知基因進行致病突變的篩選。后者是根據致病基因的可能功能,檢測Genbank中的基因功能區域,將含有接近功能域的基因用于致病的突變檢測。
人類基因克隆即基因通過DNA復制及細胞分裂把遺傳信息傳遞給下一代,并通過控制蛋白質的合成使遺傳信息得到表達。 目前人類基因克隆的主要策略有三種:一是反向遺傳學定位克隆 策略,它通過RFLP、微衛星DNA 等遺傳標記,先獲得某一表型基因在染色體上的定位,再在候選區域內選擇已知基因,進行致病突變的篩選,并獲得cDNA 及全基因;另一類是從蛋白質功能著手的功能克隆策略,采用以消減雜交為策略的多種分子生物學手段,先通過消減獲得特異表達或缺失的基因片段,然后進行染色體定位乃至獲得全基因。此外,尚有介于兩者之間的候選克隆 策略,包括定位候選克隆和功能候選,前者是在將疾病基因以連鎖分析和染色體分析基本定位以后,再在候選區域內選擇所有已知基因進行致病突變的篩選。后者是根據致病基因的可能功能,檢測Genbank中的基因功能區域,將含有接近功能域的基因用于致病的突變檢測。
總結
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