樣品條帶很淺原因很多，可能原始蛋白的濃度掌握不是很好，上樣很稀這樣是個(gè)很重要的原因。此外在賦予一抗的時(shí)候最好4度過夜，溫度太高非特異性結(jié)合會(huì)變多，導(dǎo)致后期背景較黑。另外在洗滌NC膜或PVDF膜應(yīng)采用PBST或TBST緩沖溶液，這樣可以促進(jìn)抗體和表位的特異結(jié)合。

可能因?yàn)槟z凝的不均勻，聚合的不是很好，灌膠的時(shí)候盡量混勻。可能是你樣品的問題，如果鹽濃度較高，便會(huì)擠壓其它條帶，致使條帶寬窄不一，由于同樣的原因，樣品在凝膠中的速度會(huì)很慢，造成條帶走的較慢，好像與你的預(yù)想不一致。常見的原因是：每孔上樣量不均勻，應(yīng)確保每孔中上樣量一致。可能是系統(tǒng)的pH出了問題，有可能是你的電極緩沖液，也有可能是凝膠緩沖液，更新緩沖液看看，看是否能成功。

總結(jié)

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