分子模擬對(duì)接和定點(diǎn)突變提高10β–去乙酰巴卡亭-華南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)

華南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)?2018,?39(5):?87-92

Journal?of?South?China?Agricultural?University doi:?10.7671/j.issn.1001-411X.2018.05.013

歐陽萍蘭,?黃佳俊,?林淑玲,?等.?分子模擬對(duì)接和定點(diǎn)突變提高10β–去乙酰巴卡亭Ⅲ乙酰氧基轉(zhuǎn)移酶的活力[J].?華南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào),?2018,?39(5):?87-92.

分子模擬對(duì)接和定點(diǎn)突變提高10β–去乙酰巴卡亭Ⅲ

乙酰氧基轉(zhuǎn)移酶的活力

1,2 1,2 1,2 1,2 1,2 1,2 1 1

歐陽萍蘭 ，黃佳俊 ，林淑玲 ，魏　韜 ，林俊芳 ，郭麗瓊 ，劉俊峰，劉綺倩

(1?華南農(nóng)業(yè)大學(xué)?食品學(xué)院，廣東?廣州?510642；??2?廣東省微生態(tài)制劑工程技術(shù)研究中心，廣東?廣州?510640)

摘要: 【目的】提高 10β –去乙酰巴卡亭Ⅲ乙酰氧基轉(zhuǎn)移酶(DBAT)活力，從而更高效地體外酶促合成巴卡亭Ⅲ。

【方法】通過DBAT與其天然底物乙酰CoA 的計(jì)算機(jī)分子模擬對(duì)接，選定C165W、N300I、F160C?3個(gè)氨基酸殘基進(jìn)

行單點(diǎn)定點(diǎn)突變。突變基因經(jīng)大腸埃希菌重組表達(dá)，突變重組酶特性經(jīng)體外酶促反應(yīng)測(cè)定。【結(jié)果】3種突變重組酶

的相對(duì)分子質(zhì)量為67?000；最適反應(yīng)溫度均為32.5?℃，與野生酶DBAT一致；DBATF160C 與DBAT 的最適反應(yīng)

C165W N300I C165W F160C N300I

pH為7.5，略高于DBAT 和DBAT 的最適反應(yīng)pH(7.0)；DBAT 、DBAT 和DBAT 的比活力與

DBAT相比分別提高了61.5%、59.6%和19.2%，催化效率分別提高了55.4%、35.1%和2.9%，3種突變酶的米式常

數(shù)(Km)和最大反應(yīng)速率(vmax)均高于DBAT。【結(jié)論】疏水突變導(dǎo)致突變酶的比活力相比野生型均有顯著提高，研

究結(jié)果為體外高效酶促合成紫杉醇化學(xué)半合成的直接前體物巴卡亭Ⅲ奠定了基礎(chǔ)。

關(guān)鍵詞: 10β–去乙酰巴卡亭Ⅲ乙酰氧基轉(zhuǎn)移酶；分子模擬對(duì)接；定點(diǎn)突變；比活力；酶促反應(yīng)；巴卡亭Ⅲ

中圖分類號(hào): Q55；S18?　　　　?文獻(xiàn)標(biāo)志碼: A　　　　?文章編號(hào): 1001-411X(2018)05-0087-06

Increase of 10-deacetyl baccatin Ⅲ-10β-O-acetyl transferase activity

with molecular docking simulation and site-directed mutation

1,2 1,2 1,2 1,2

總結(jié)

以上是生活随笔為你收集整理的计算机模拟定点突变,分子模拟对接和定点突变提高10β–去乙酰巴卡亭-华南农业大学学报.PDF...的全部內(nèi)容，希望文章能夠幫你解決所遇到的問題。

如果覺得生活随笔網(wǎng)站內(nèi)容還不錯(cuò)，歡迎將生活随笔推薦給好友。