酰胺凝膠(polyacrylamide gel)。一般凝膠介質中的pH被維持在堿性區，目的是使大多數蛋白質都帶有負電荷，這樣它們可以向陽極遷移。蛋白質的遷移與蛋白質的質量和帶電荷的多少有關。

2.聚丙烯酰胺凝膠電泳

聚丙烯酰胺凝膠電泳(polyacrylamide gel electrophoresis,簡稱PAGE)，也稱圓盤凝膠電泳或圓盤電泳 (disc gel electrophoresis)，它是在區帶電泳的基礎上發展起來的。它以聚丙烯Ift胺凝膠為支持物，一般制成凝膠柱或凝膠板，凝膠是由相連的二部分組成(小的部分是濃縮膠，大的部分是分離膠)，這二部分凝膠的濃度(孔徑大小)、緩沖液組分和離子強度,pH以及電場強度都是不同的，即不連續的。這樣,電泳時樣品首先在不連續的兩相間積聚濃縮而成很薄的起始區帶(厚度約為

0.1 mm)，然后再進行電泳分離。

PAGE是用丙烯酰胺(acrylamide，Acr)和交聯劑亞甲基雙丙烯酰胺(N，N -methylen。bisacrylamide，Bis)在催化劑的作用下聚合而成，聚合反應的催化系統有兩種。

化學聚合:催化劑過硫酸銨(AP)，加速劑TEMED

光聚合:催化劑核黃素，加速劑TEMED

不連續PAGE三種效應：電荷效應、分子篩效應和濃縮效應

聚丙烯酰胺凝膠(PAG)具有三維網狀結構，能起分子篩作用。用它作電泳支持物，對樣品的分離取決于各組分所帶電荷的多少及分子大小。

聚丙烯酰胺凝膠電泳(PAGE)還具有濃縮效應，即在電泳開始階段，由于不連續pH梯度作用，將樣品壓縮成一條狹窄區帶，從而提高了分離效果。

3.毛細管電泳

毛細管電泳又稱毛細管區帶電泳，它是在毛細管( 2-75μm)中裝入緩沖液，從其一端注入樣品，在毛細管兩端加高壓直流電實現對樣品的分離，分離后的樣品依次通過設在毛細管一端的檢測器檢出。該法克服了傳統區帶電泳的熱擴散和樣品擴散的問題，實現了快速和高效分離。

毛細管電泳是近年來發展起來的一項新技術，被認為是90年代最有影響的分離手段之一。目前已廣泛用于氨基酸分析、蛋白質高效分離、指紋圖譜研究、分離合成的寡核苷酸、 DNA序列測定及PCR產物的分析鑒定等。

毛細管電泳又稱高效毛細管電泳( High Performance Capillary Electrophoresis, HPCE) 是一種儀器分析方法。通過施加10-40kV的高電壓于充有緩沖液的極細毛細管，對液體中離子或荷電粒子進行高效、快速的分離。現在，HPCE已廣泛應用于氨基酸、蛋白質、多肽、低聚核苷酸、DNA等生物分子分離分析，藥物分析，臨床分析，無機離子分析，有機分子分析，糖和低聚糖分析及高聚物和粒子的分離分析。人類基因組工程中DNA的分離是用毛細管電泳儀進行的。

4.等電聚焦

原理: 在一定抗對流介質(如凝膠)中加入兩性電解質載體(Ampholyte,是一種多氨基多羧基的混合物，由異構物和同系物組成，其pK和pI值各自相異卻又相近)，當直流電通過時，便形成一個由陽極到陰極pH值逐步上升的梯度。兩性化合物在此電泳過程中，就被濃集在與其pI相等的pH區域，從而使不同化合物能按其各自等電點得到分離。

應用：高效率分離純化蛋白質測定蛋白質pH

5.層析聚焦

該法是在等電點聚焦方法基礎上發展起來的，其分離純化蛋白質的依據是等電點的差異和離子交換行為。蛋白質按其等電點在pH梯度環境中進行排列的過程叫做聚焦效應。 pH梯度的形成(由多緩沖劑和多緩沖交換劑形成)是聚焦效應的先決條件，如果一種蛋白質加到已形成pH梯度的層析柱上時,由于洗脫液的連續流動，蛋白質將迅速地遷移到與它等電點相同的pH處。從此位置開始，該蛋白質將以緩慢的速度進行吸附、解吸附，直到在等電點pH時被洗出。在聚焦層析過程中,一種樣品分次加入時，只要先加入者尚未洗出,并且有一定的時間進行聚焦,剩余樣品還可以加到柱上,其聚焦過程都能順利完成。

6.離子交換層析

原理

基質疏水型離子交換劑；親水型離子交換劑

應用制備純化生物物質定量、定性測定混合物中各組分

1.平衡階段:離子交換劑與反離子結合

2.吸附階段：樣品與反離子進行交換

總結

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