【摘要】目的：產(chǎn)碳青霉烯酶腸桿菌科細(xì)菌在全球范圍內(nèi)的廣泛播散是臨床抗感染疾病診治工作的一個(gè)重大挑戰(zhàn)，因此，快速、準(zhǔn)確地檢測(cè)這些微生物至關(guān)重要。本研究建立了一種免疫層析技術(shù)（Carba5），并評(píng)價(jià)該技術(shù)對(duì)五種主要碳青霉烯酶（KPC、NDM、VIM、IMP和OXA-48-like型）的鑒定價(jià)值。方法：回顧性和前瞻性收集腸桿菌科臨床菌株共計(jì)296株，挑取單克隆菌落于提取緩沖液中，充分混勻后滴加于Carba5檢測(cè)板條的檢測(cè)孔中，反應(yīng)15分鐘直接讀取檢測(cè)結(jié)果。結(jié)果：296株待檢菌中有185株被正確地檢出含有Carba5中的靶標(biāo)酶；除個(gè)別菌株產(chǎn)的OXA-163和OXA-405的碳青霉烯酶因活性低而未被測(cè)出，其余菌株檢測(cè)結(jié)果均為陰性。整個(gè)檢測(cè)過程均在15分鐘內(nèi)完成；未觀察到與其他非靶標(biāo)酶間的交叉反應(yīng)，如ESBLs、AmpCs或苯唑西林酶（OXA-1、-2、-9和-10型酶）。該方法的靈敏度為100%，特異性分別為回顧性菌株95.3%和前瞻性100%。結(jié)論：Carba5能夠有效地檢測(cè)五種主要碳青霉烯酶，該法快速、簡(jiǎn)便，易于在臨床微生物實(shí)驗(yàn)室作為常規(guī)工作開展。

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產(chǎn)碳青霉烯酶的細(xì)菌在世界范圍內(nèi)的廣泛播散給我們帶來了巨大的經(jīng)濟(jì)壓力，已然成為了一個(gè)全球共同關(guān)注的問題[1, 2]。在這些產(chǎn)酶耐藥菌中，腸桿菌科細(xì)菌是醫(yī)院感染的主要病原體（其中腸桿菌科細(xì)菌中的大腸埃希菌同時(shí)也是社區(qū)獲得性感染的病原體）。產(chǎn)碳青霉烯酶腸桿菌科細(xì)菌（carbapenemase-producing Enterobacteriaceae，CPE）往往是多重耐藥菌，由其引起的感染，臨床可用的抗菌藥物選擇非常少，有時(shí)候甚至無藥可用[3, 4]。基于此，CPE毋庸置疑地成為了公共衛(wèi)生事業(yè)的嚴(yán)重威脅。因此，快速檢測(cè)及確診CPE對(duì)臨床醫(yī)生及時(shí)采取有效感控措施、調(diào)整抗菌治療方案以及改善預(yù)后等非常重要。根據(jù)氨基酸序列的不同，碳青霉烯酶可以分為三類，即Ambler分類的A、B和D型。碳青霉烯酶型別不一樣對(duì)抗生素的水解活性也有差異，有的很弱、有的很強(qiáng)：比如，B類金屬碳青霉烯酶對(duì)頭孢他啶/阿維巴坦有很強(qiáng)的水解活性，而A類KPC型碳青霉烯酶卻沒有[5, 6]。因此，在臨床診治工作中非常有必要對(duì)酶型進(jìn)行具體區(qū)分。

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目前，臨床微生物實(shí)驗(yàn)室主要在用的碳青霉烯耐藥菌檢測(cè)方法包括表型檢測(cè)方法、分子檢測(cè)方法及抗體包被檢測(cè)技術(shù)等，不同的檢測(cè)方法各有優(yōu)勢(shì)，也有一定應(yīng)用局限性。根據(jù)檢測(cè)細(xì)菌對(duì)碳青霉烯類抗生素的水解活性為原理的表型診斷方法有基質(zhì)飛行質(zhì)譜技術(shù)（MALDI-TOF MS）[7, 8]、生化反應(yīng)試驗(yàn)（如Carba-NP試驗(yàn)及其改良的方法）[9, 10]、碳青霉烯類滅活實(shí)驗(yàn)（carbapenem inactivation method，CIM試驗(yàn)）[11]和OXA-48紙片試驗(yàn)[12, 13]等；此外，有研究者探索性地證明了其他在臨床上較廣泛應(yīng)用的表型確認(rèn)方法的價(jià)值性，但是缺點(diǎn)是耗時(shí)長(zhǎng)，需要24小時(shí)完成，這些方法亦不能檢測(cè)出具體的碳青霉烯酶型別[13, 14]。除表型檢測(cè)方法外，分子診斷方法無疑彌補(bǔ)了這一缺陷，如終點(diǎn)PCR和實(shí)時(shí)熒光定量PCR。通過單通道或多通道PCR擴(kuò)增實(shí)現(xiàn)對(duì)多種碳青霉烯酶基因型的直接檢測(cè)，具有較高的靈敏度及特異性的優(yōu)勢(shì)[15-17]；然而這些方法價(jià)格昂貴，而且需要高水平的專業(yè)技術(shù)才能獲得準(zhǔn)確的結(jié)果，并不適合全球所有的臨床微生物實(shí)驗(yàn)室。免疫層析法（lateral flow immunoassay，LFIA）是一種通過將不同型別的碳青霉烯酶抗體包被于固態(tài)基質(zhì)上、根據(jù)抗原-抗體結(jié)合的原理實(shí)現(xiàn)對(duì)CPE及具體碳青霉烯酶酶型的檢測(cè)方法[18-22]。LFIA法不能同時(shí)檢測(cè)五種主要碳青霉烯酶，但具有快速——在15分鐘內(nèi)完成對(duì)純菌落的直接檢測(cè)，且100%靈敏度和特異性的顯著優(yōu)勢(shì)。

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總結(jié)

以上是生活随笔為你收集整理的多重免疫层析技术在产碳青霉烯酶肠杆菌科细菌快速鉴定中的价值的全部?jī)?nèi)容，希望文章能夠幫你解決所遇到的問題。

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