点成分享 | 离心机的原理、分类、应用及其在新冠病毒分离中的使用
一、應用場景
實驗室離心機是一種通過繞固定軸對物體進行旋轉,使其受到離心力作用而加速物質沉降速度并實現不同分子顆粒分離的實驗設備。
離心機廣泛應用于化工、食品、制藥、環保、教學、醫療等科學研究和生產部門,在物質分離和提取方面起到十分重要的作用,已成為現代科學研究重要儀器設備之一,更是生物學、生物化學、醫學、生物工程、生物制藥等行業科研與生產的必備設備。
二、原理
離心是利用離心力將顆粒/不同沉降系數的物質從溶液中分離出來的一種技術。離心機就是應用了離心原理,根據顆粒的大小、形狀、密度、溶液粘度等差異,通過離心機上轉子的高速旋轉產生強大的離心力,加快混合液中不同比重成分的沉降速度,把樣品中不同沉降系數和浮力密度的物質分離或分層分級,離心過程中密度較大的粒子會被更快地拋到離心管外側,而較輕的顆粒則會移向中心,這樣可以分離出懸浮液中的固體顆?;蛘卟煌芏鹊囊后w成分。
(圖片來源于網絡)
三、分類
目前市面上離心機的種類繁多,在不同領域有不同適用的離心機。根據轉速不同、是否制冷、設備大小等標準可以進行以下分類:
根據轉速不同,可以分為:低速離心機、高速離心機、超高速離心機等
根據是否制冷,可以分為:冷凍離心機和普通離心機等
根據應用場景,可以分為:實驗室離心機和工業離心機等
根據設備大小。又可以分為:迷你離心機、臺式離心機、立式離心機等
四、實驗室離心機常見應用
常用于不相溶液體的分離、 蛋白質提純、懸乳液沉淀分離、細胞提取、DNA/RNA提取、PCR板離心、生物成分沉淀等應用。
(圖片來源于網絡)
五、離心機在新冠病毒研究中的應用
在如今新冠肺炎疫情成為了常態性現狀的背景下,對于新冠病毒的研究是當前生物學、醫學等科研人員研究的一大重點。2020年初,北京協和醫院就發布了新冠病毒操作指南,在整個參考實驗過程中,病毒樣本的裂解過程是多次需要使用到離心機的。
病毒樣品的裂解過程中,全程都建議在生物安全柜中使用離心機,這樣可以有效防止樣品泄漏和污染帶來的麻煩,實驗中用到的離心機轉速要求需要達到8000rpm及以上,這屬于高速離心機,且要可適配低容量EP管。
以下是官方提供的病毒樣本裂解的參考過程:
1、用1.5ml的無菌離心管(EP管),移液器移取560μl 的AVL裂解液,并加入5.6μl Carrier RNA和140μl已滅活的待提取核酸的待測樣本,渦旋振蕩15s,室溫靜置10min;
2、將上述EP管放入離心機內瞬時離心以去除可能殘留在EP管蓋上的裂解產物,防止污染;
3、裂解完成后,向EP管中加入560μl無水乙醇,并振蕩混勻15s;
4、再次將上述EP管放入離心機內瞬時離心以去除可能殘留在EP管蓋上的裂解產物,防止污染;
5、向離心柱加入裂解產物630μl,并用8000rpm轉速離心1min;建議在生物安全柜中進行離心,防止樣品泄漏和污染帶來的危害;若離心機在生物安全柜之外,則每次使用前都需進行外表面消毒。
6、更換廢液收集管,要從離心機中小心取出離心柱,將上層離心柱轉移到新收集管中,繼續將剩余裂解產物630μl加入離心柱中,若樣本體積大于140μl時需重復此步驟,直到全部裂解產物都過柱離心,8000 RPM轉速離心1min,之后小心地將離心柱轉移到新的收集管中;
7、取500μl AW1加入離心柱中(注意,此處加樣操作時務必將移液器吸頭接觸離心柱內壁緩慢加樣),8000 rpm轉速離心1min,小心取出離心柱,更換新的收集管;
8、取500μl AW2加入離心柱中,14000rpm轉速離心3min,小心取出離心柱,更換新的離心柱上端收集管,置于離心機中使用最大轉速離心1min,以確保將AW2中的殘液完全離心干凈;
9、取無菌1.5mlEP管收集核酸。將離心柱上端小心放入1.5mlEP管中,取40-60μl的洗脫液AVE加入到離心柱中(注意:洗脫液應盡量全部覆蓋住離心柱膜),用EP管的管蓋蓋住離心柱,使用無菌剪刀剪去原離心柱管蓋;
10、室溫靜置1min,將其放入離心機中8000rpm轉速離心1min來回收核酸;
11、丟棄離心柱,此時EP管中就是我們想要提取的核酸了,之后做好標記與登記。
總結
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