点成分享丨细胞培养三步骤——复苏、传代、冻存
細(xì)胞培養(yǎng)是指在體外模擬生物體內(nèi)環(huán)境（無菌、適宜溫度、酸堿度和一定營養(yǎng)條件等），使之生存、生長、繁殖并維持主要結(jié)構(gòu)和功能的一種方法。
細(xì)胞培養(yǎng)也叫細(xì)胞克隆技術(shù)，是細(xì)胞生物學(xué)研究方法中重要和常用技術(shù)，通過細(xì)胞培養(yǎng)既可以獲得大量細(xì)胞，又可以借此研究細(xì)胞的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、細(xì)胞的合成代謝、細(xì)胞的生長增殖等。
細(xì)胞培養(yǎng)的具體步驟可分為：細(xì)胞復(fù)蘇、細(xì)胞傳代、細(xì)胞凍存
一、細(xì)胞復(fù)蘇
1. 細(xì)胞復(fù)蘇的原則：快速融化
在復(fù)蘇細(xì)胞時必須遵循快速融化的原則，即必須將凍存在-196℃液氮中的細(xì)胞快速融化至 37 ℃，因為這樣可使凍存時細(xì)胞外的冰晶迅速融化，避免冰晶緩慢融化時進(jìn)入細(xì)胞形成再結(jié)晶，對細(xì)胞造成損害。
2. 細(xì)胞復(fù)蘇操作過程
? ?二、細(xì)胞傳代
1. 細(xì)胞傳代中遇到的問題及解決方案：
（1）傳代密度過高
一旦細(xì)胞養(yǎng)太久至融合度過高（>90%）才傳代，容易使細(xì)胞產(chǎn)生老化現(xiàn)象，甚至是堆疊，再消化細(xì)胞時不易吹打成單顆細(xì)胞，即便再重新鋪盤傳代，細(xì)胞也無法回到原本的特性了。（如：單層細(xì)胞，沒長滿就發(fā)生堆疊現(xiàn)象）
解決方案：盡量避免融合度過高，鏡下觀察融合度約達(dá)到80%即可傳代分盤。
（2）傳代密度低
哺乳動物貼壁培養(yǎng)細(xì)胞，若細(xì)胞培養(yǎng)到80-90%密度需要開始傳代，在傳代接種細(xì)胞密度過低，細(xì)胞間距離太遠(yuǎn)，就無法在細(xì)胞間產(chǎn)生黏附及通信作用，幫助信號傳導(dǎo)并活化細(xì)胞；總體細(xì)胞量不足，分泌的生長因子濃度會不足以產(chǎn)生利于生長的微環(huán)境，以上皆會造成增殖速度遲緩或細(xì)胞死亡。
解決方案：細(xì)胞傳代時，要進(jìn)行準(zhǔn)確的細(xì)胞計數(shù)，確保鋪盤的密度。
2. 細(xì)胞傳代操作過程：
三、細(xì)胞凍存
1. 細(xì)胞凍存的基本原理：慢凍
(1) 手動降溫
將細(xì)胞依序放在4℃（30分鐘）、-20℃（1小時）、-80℃（過夜）后移至液氮中保存。
(2) 程序降溫盒
是一般最廣泛使用的降溫法，為一種特制冷凍容器（填充異丙醇或依靠特制金屬導(dǎo)熱），使細(xì)胞以每分鐘約-1℃的速度降至-80℃（過夜），然后移至液氮中保存。
(3) 免液氮程序降溫儀
一種新型自動化程序降溫方法，通過微處理器精確控制冷卻速率和樣品溫度，能夠控制樣品線性/非線性降溫，能夠有效減少凍融過程對于細(xì)胞或組織的傷害，重現(xiàn)性好，降溫過程可控，成本低。（例如點成生物CRF-1免液氮程序降溫儀）
2. 細(xì)胞凍存操作過程：
點成生物推薦
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點成CRF-1免液氮程序降溫儀
降溫儀頂蓋打開示意圖
點成CRF-1免液氮程序降溫儀臺式設(shè)計，外形精巧，操作簡單，有無PC連接都可進(jìn)行；數(shù)據(jù)可以通過PC軟件進(jìn)行記錄，冷卻數(shù)據(jù)將直接顯示在PC屏幕上，CRF-1的冷凍能力可達(dá)零下100℃(采用細(xì)管時)。CRF-1精準(zhǔn)控制降溫速率，從而確保整個冷凍過程中溫度的精確性和重現(xiàn)性，尤其是在重要的成核/播種階段，這就確保了細(xì)胞解凍后的最佳恢復(fù)。
內(nèi)置多種降溫程序，例如胚胎、生殖細(xì)胞、干細(xì)胞等降溫程序，用戶也可自定義降溫過程，廣泛應(yīng)用于多種樣品的冷凍保存。
- 精確控制冷卻速率和樣品溫度，重現(xiàn)性好
- 使用方便簡單，樣品可原位成核/播種
- 可實現(xiàn)線性和非線性降溫方案
- 運行成本低：約為液氮降溫儀的1%
-END-
點成生物與多家先進(jìn)的國際儀器制造商（Grant、Nuve、Cellix、Microfluidic ChipShop、Beonchip、Drucker等）進(jìn)行深度合作，專注于生命科學(xué)、溫度控制、臨床應(yīng)用、微流控等領(lǐng)域；提供的產(chǎn)品有水浴、搖床、混勻器、離心機(jī)、移液槍、恒溫振蕩器、培養(yǎng)箱、蒸餾水機(jī)、程序降溫儀、微流控芯片及分析系統(tǒng)等常用實驗儀器；致力于生物科技領(lǐng)域產(chǎn)品和解決方案。
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總結(jié)
以上是生活随笔為你收集整理的点成分享丨细胞培养三步骤——复苏、传代、冻存的全部內(nèi)容，希望文章能夠幫你解決所遇到的問題。
