摘要：

南方水稻黑條矮縮病是威脅我國水稻生產(chǎn)的重要病毒病害之一,由南方水稻黑條矮縮病毒(Southern rice black-streaked dwarf virus, SRBSDV)引起。該病毒屬于呼腸孤病毒科(Reoviridae)斐濟(jì)病毒屬(Fijivirus)。主要由遷飛性的白背飛虱(Sogatella furcifera)以持久增殖型方式傳播,不經(jīng)卵傳播,白背飛虱一旦獲毒則終身帶毒；灰飛虱(Laodelphax striatellus)也可以帶毒,但不能傳毒。水稻一旦發(fā)生該病即沒有有效藥物或方法進(jìn)行治療,而且發(fā)病植株將作為侵染源被介體白背飛虱向周圍健康水稻傳播病毒,將加重田間的病害發(fā)生。因此需及時(shí)檢測(cè)田間水稻和介體昆蟲的帶毒情況,盡早拔除發(fā)病植株,滅殺田間介體昆蟲,從而阻斷病害的擴(kuò)散。目前檢測(cè)病毒的方法較多,常用RT-PCR法檢測(cè)SRBSDV,但該方法存在操作復(fù)雜、耗時(shí)、成本高等缺陷,不適用于大批量樣品的檢測(cè)。 為了建立快速、簡便、特異性的病毒檢測(cè)技術(shù),本研究優(yōu)化了免疫捕獲反轉(zhuǎn)錄擴(kuò)增(Immunocapture reverse transcription, IC-RT-PCR)和逆轉(zhuǎn)錄環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增(Reverse transcription loop-mediared isothermal amplification, RT-LAMP)體系,用于檢測(cè)水稻和介體昆蟲中的SRBSDV。通過對(duì)免疫捕獲抗體的篩選,明確SRBSDV P9-1蛋白的多克隆抗體可用于免疫捕獲反轉(zhuǎn)錄擴(kuò)增檢測(cè)技術(shù),用于捕獲水稻或介體昆蟲中的病毒,從而捕獲病毒RNA,用于RT-PCR檢測(cè)病毒。通過對(duì)環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)Mg2+濃度、dNTP濃度、反應(yīng)溫度以及鈣黃綠素用量的優(yōu)化,建立了適合檢測(cè)SRBSDV的RT-LAMP檢測(cè)方法,并將RT-LAMP方法應(yīng)用于檢測(cè)2013年不同地區(qū)采集到的水稻病樣和介體昆蟲的帶毒率。此外,本研究通過原核表達(dá)蛋白制備了RBSDV編碼蛋白P9-1的多克隆抗體,Western blot實(shí)驗(yàn)表明所制備的抗體可特異性檢測(cè)RBSDV侵染水稻中的P9-1蛋白,并可通過IC-RT-PCR方法檢測(cè)RBSDV侵染的褐飛虱。 通過對(duì)檢測(cè)方法的比較,本研究所建立的RT-LAMP較IC-RT-PCR方法靈敏。由于IC-RT-PCR不需要提取RNA,避免了提取單頭昆蟲RNA的困難,因此比較適用于單頭飛虱帶毒檢測(cè)；而RT-LAMP方法可同步進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄和PCR,與常規(guī)RT-PCR方法比較縮短了檢測(cè)時(shí)間,因此適用于水稻樣品的快速檢測(cè)。本研究對(duì)RT-LAMP和IC-RT-PCR檢測(cè)方法的優(yōu)化豐富了水稻病毒的檢測(cè)技術(shù),有利于田間水稻病毒病害的監(jiān)測(cè)和診斷。

展開

總結(jié)

以上是生活随笔為你收集整理的计算机网络PIC和SDV,SRBSDV和RBSDV检测技术的建立的全部內(nèi)容，希望文章能夠幫你解決所遇到的問題。

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