目前，流式細胞術廣泛應用于細胞表面和細胞內分子表達特征的分析，界定不同種類的細胞群，測定分離出的亞類純度，分析細胞的大小和總量，它可以同時分析單個細胞的多個參數。它主要用于檢測標記在抗體上的熒光強度，這些熒光抗體則可以檢測與特定細胞分子結合的蛋白或配體，如與 DNA 結合的溴化丙啶 (PI) 等。

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　　染色步驟包括：將培養的細胞或組織樣品制成單細胞懸液，然后將細胞放入管子或酶標板中與熒光標記或未標記的抗體孵育。之后將細胞放入流式細胞儀中進行分析。

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　　懸浮緩沖液中染色的細胞樣品通過流式細胞儀時，由于鞘液的作用被限制在液流的軸線上，從而通過一個非常小的噴嘴。這種微小的“流液束”使細胞一個接一個地通過激光，細胞/粒子通過通道時散射的光線被多個探測器檢測到。其中光柱前有一個檢測器（稱為前向角散射或簡稱 FSC），它的旁邊有幾個檢測器（稱為側向散射或簡稱 SSC）。熒光檢測器用于檢測熒光染料本身。粒子/細胞通過光束時，將出現光線散射，散射會通過前向散射和側向散射被檢測到。散射和熒光數據會結合起來分析。其中前向角散射光與細胞的大小有關；而側向角散射則依賴于粒子/細胞的密度（比如胞漿顆粒數量，細胞膜尺寸），并往往以這種方式，根據不同的大小和密度的差異而將細胞群區分開來。當由相應激發波長的激光激發時，用于檢測或染色的熒光染料就會發光。這些粒子/細胞就可分別被檢測并進行數據分析。

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直接染色：

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　　直接免疫熒光染色時，細胞與直接結合有熒光染料（如 FITC 標記）的抗體孵育。它的優點在于只需要抗體孵育這一個步驟，從而消除了來自二抗的非特異性結合的可能性。這對細胞內染色特別有用，由于大的抗體熒光分子復合物包括二抗被困在細胞內造成背景，或甚至無法進入細胞，阻止了一抗的檢測。

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總結

以上是生活随笔為你收集整理的流式细胞术及常见问题分析的全部內容，希望文章能夠幫你解決所遇到的問題。

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