提及 PCR 實驗，是否出現過這樣的問題？

假陽性

非特異性擴增

數據重復性差

假陰性

拖尾

無擴增產物

樣本降解

其實，造成這些結果的原因有很多，例如引物質量不佳、模板質量不好、退火溫度不合適等，但還有一個不容忽視的問題——PCR 體系蒸發。

聚合酶鏈式反應（PCR）需要依賴 PCR 儀對各反應階段的溫度和加熱時長進行控制，整個 PCR 反應通常需要經過 20～40 次加熱、冷卻的溫度循環，這個過程帶來的反應如試劑蒸發和損失，對許多 PCR 實驗結果影響顯著，在檢測靈敏度高的 qPCR 實驗中還影響透光性，從而導致結果不準確。

那么，影響 PCR 體系蒸發的因素都有哪些呢？

1、熱蓋壓力、溫度

為了防止 PCR 高溫反應中試劑向上揮發，PCR 儀一般通過在試液孔板上方覆蓋熱蓋單元，以上方高溫來減少試劑的揮發。但熱蓋能完美解決蒸發問題嗎？

PCR 儀的熱蓋大致可以分為以下四種：非可調式熱蓋、可調節式熱蓋、自適應式熱蓋和自動式熱蓋。而「可調節式熱蓋」利用手擰壓緊式，擰不緊會發生試劑蒸發，一些廠家通過增加熱蓋壓力以減少邊緣蒸發，但該方法并不能完全消除這一現象，有時擰得過緊反而可能出現壓壞管子、擰壞旋鈕的情況，有的儀器甚至會因擰得過緊而導致試劑蒸發。也有一些廠家通過在熱蓋上增加軟性導熱材料來解決這一問題，但目前，軟性導熱材料的使用壽命無法明確。

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總結

以上是生活随笔為你收集整理的影响 PCR 体系蒸发的三大因素的全部內容，希望文章能夠幫你解決所遇到的問題。

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