測(cè)定土壤微生物物種豐富度通常采用分子生物學(xué)技術(shù)，如PCR-DGGE（聚合酶鏈反應(yīng)-變性梯度凝膠電泳）、PCR-TGGE（聚合酶鏈反應(yīng)-溫度梯度凝膠電泳）和PCR-RFLP（聚合酶鏈反應(yīng)-限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性）等。 具體操作步驟如下： 1.采集土樣：通常采用不同深度、不同生長(zhǎng)季節(jié)和不同種植作物地點(diǎn)的土樣。樣品應(yīng)隨機(jī)采集，避免重復(fù)采集同一地點(diǎn)的土樣。 2.提取土壤DNA：將采集的土樣通過不同的DNA提取方法提取土壤中的總DNA。 3.PCR擴(kuò)增：使用通用引物（如16S rRNA基因?qū)?xì)菌的引物，18S rRNA基因?qū)φ婢囊铮U(kuò)增所需要的基因片段。 4.電泳分離：將PCR產(chǎn)物通過含有變性梯度或溫度梯度的凝膠電泳進(jìn)行分離。通常通過DGGE或TGGE來檢測(cè)產(chǎn)物的物種多樣性，也可以使用RFLP等。 5.圖譜分析：用所得的指紋圖譜進(jìn)行分析，識(shí)別出樣品中的微生物物種和數(shù)量。可以采用聚類分析或PCA分析等方法分析數(shù)據(jù)。 6.物種豐富度計(jì)算：根據(jù)PCR-DGGE或PCR-TGGE電泳圖上的 PCR產(chǎn)物數(shù)量和強(qiáng)度，計(jì)算物種豐富度的各項(xiàng)指標(biāo)，如Shannon-Weaver指數(shù)、Simpson指數(shù)、Pielou的均勻度指數(shù)等。 總體來說，采用 PCR-DGGE或PCR-TGGE技術(shù)能夠較準(zhǔn)確的測(cè)定土壤微生物物種的豐富度。

總結(jié)

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