化学合成的RNA与体外转录的RNA有什么不同?
生活随笔
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化学合成的RNA与体外转录的RNA有什么不同?
小編覺得挺不錯的,現在分享給大家,幫大家做個參考.
同一序列無論是化學合成還是體外轉錄理論上來講,都是一樣的。但是化學合成,人為控制,準確度高, 與提供的序列一致。但是體外轉錄是一個復雜的事件,涉及到RNA聚合酶的作用、逆轉錄體系、逆轉錄條件、模板單鏈DNA的二級結構等因素,使得擴增出來的產物可能長短不一,經酶切后出現LADDER。 同理,在做DNA擴增時,通常采用大腸桿菌中的克隆系統來擴增測序正確的片段而非直接利用PCR產物。 總之,化學合成RNA準確,但成本高,不適合需要大量RNA模板的實驗;體外轉錄方便快捷,成本相對較低,適用一般的實驗需要,若要構建克隆文庫,則需要準確的RNA序列。
如同樓上所說,生物體內的RNA轉錄是個復雜的過程,該過程一些環境的變化會影響各種酶的表達,從而轉錄出不同的RNA長度。而公司化學合成時,嚴格控制條件,同時又經過高度純化,從而使獲得的RNA大小相似。
關于該問題,個人覺得可以這樣來解釋。化學合成的,最大的特點就是就是序列的專一性,你需要什么它合成的就是那段序列。但是體外轉錄的就是不一樣,樓主提取的RNA根據瓊脂糖電泳的結果來看,它本身就是彌散的,因為我們知道轉錄是一個時空產物,可能在這樣一個條件下就會有很多的產物,所以樓主在做酶切的時候切出很多條帶是很正常的。
如同樓上所說,生物體內的RNA轉錄是個復雜的過程,該過程一些環境的變化會影響各種酶的表達,從而轉錄出不同的RNA長度。而公司化學合成時,嚴格控制條件,同時又經過高度純化,從而使獲得的RNA大小相似。
關于該問題,個人覺得可以這樣來解釋。化學合成的,最大的特點就是就是序列的專一性,你需要什么它合成的就是那段序列。但是體外轉錄的就是不一樣,樓主提取的RNA根據瓊脂糖電泳的結果來看,它本身就是彌散的,因為我們知道轉錄是一個時空產物,可能在這樣一個條件下就會有很多的產物,所以樓主在做酶切的時候切出很多條帶是很正常的。
總結
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