ZFN和TALENs都是作為二聚體發揮作用的，其特異性是由DNA綁定的區域決定的，這個區域在每個剪切位點最多可以識別36bp。然而，在在II型CRISPR系統中的Cas9是由一種RNA引導的核酸，它的特異性是由PAM和PAM上游的20個引導核苷酸決定的。這表明，3’12個堿基的“種子序列”是最關鍵的，而剩下的8個堿基（非種子序列）甚至PAM序列都是可以錯配的。ZFN的特異性由一種不帶偏見的全基因組分析進行，并且發現存在頻率低，但是可以檢測到的脫靶事件的發生，其可以定義為一個高度有限的一部分。已經有研究表明，TALENs有比ZFN更低的細胞毒性和脫靶效率。基于這個研究，TALENs誘導的CCR5特異性突變在CCR5的對偶基因上發生率是17%，而在高度同源的CCR2位點上只有1%。相反，CCR5特異性的ZFN的活性在這兩個位點是相在當的，CCR5位點的突變頻率是14%，而CCR2的是12%。CRISPR/Cas系統在細胞毒性評價或者DSB誘導的檢測中都沒有明顯的脫靶現象。然而，最近的研究發現，CRISPR誘導的靶向不同的人類細胞的基因出現了顯著的脫靶現象。三個其他的小組利用更系統的方法在人類細胞中評估了CRISPR的脫靶活性，其結果表明CRISPR可能能夠發生目標不匹配，從而在預測的脫靶位點上引入微缺失或者插入（插入缺失）。此外，靶向位點的定位和內涵能夠顯著的影響gRNA識別他們的靶向目標，而在基因組序列中的“脫靶序列”也是一樣的。已經有報告說，脫靶效應能夠通過小心的控制Cas9的mRNA的濃度來克服。此外，在基因編輯的時候使用配對的Cas9的切口酶已經表明能夠顯著的減少至少1500倍的脫靶活性。

總結

以上是生活随笔為你收集整理的三种基因编辑系统的特异性如何？的全部內容，希望文章能夠幫你解決所遇到的問題。

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