核酸检测技术有哪些?
生活随笔
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核酸检测技术有哪些?
小編覺(jué)得挺不錯(cuò)的,現(xiàn)在分享給大家,幫大家做個(gè)參考.
有的,現(xiàn)在英國(guó)TwistDx Inc公司開(kāi)發(fā)的重組酶聚合酶擴(kuò)增就是可以替代PCR技術(shù)的核酸檢測(cè)方法。重組酶聚合酶擴(kuò)增英文全稱(chēng)是Recombinase Polymerase Amplification,簡(jiǎn)寫(xiě)為RPA。實(shí)驗(yàn)室使用的PCR儀實(shí)際上就是一個(gè)溫度控制器,控制環(huán)境溫度適合于變性、退火、延伸。而RPA技術(shù)可以檢測(cè)單核酸,而且檢測(cè)時(shí)間快速,沒(méi)有變性過(guò)程。RPA反應(yīng)的過(guò)程中有三種酶:能結(jié)合單鏈核酸(寡核苷酸引物)的重組酶、單鏈DNA結(jié)合蛋白(SSB)和鏈置換DNA聚合酶。這三種酶的混合物在常溫條件下也有活性,所以RPA儀不需要額外的控溫部件,相比于PCR儀更容易攜帶。RPA的作用原理是將重組酶與引物結(jié)合形成蛋白-DNA復(fù)合物,能在雙鏈DNA中尋找同源序列。DNA在引物定位同源序列,發(fā)生鏈交換反應(yīng)后啟動(dòng)合成,模板上的目標(biāo)區(qū)域被指數(shù)式擴(kuò)增。被替換的DNA鏈與單鏈DNA結(jié)合蛋白結(jié)合緊密,防止進(jìn)一步替換。RPA反應(yīng)十分迅速,不超過(guò)十分種。除了便攜性和快捷性,RPA檢測(cè)還具有很高的靈敏度很高,能夠擴(kuò)增痕量的核酸(尤其是DNA)模板到可以檢出的水平,一般從單個(gè)模板分子能得到大約1012的擴(kuò)增產(chǎn)物。此外, RPA不需要復(fù)雜的樣品處理,也不需要提取核酸,可以不受場(chǎng)地限制進(jìn)行實(shí)地檢測(cè)。RPA檢測(cè)不限于DNA,也可以直接RNA,不需要將RNA逆轉(zhuǎn)錄為cDNA,大大簡(jiǎn)化了操作步驟。但是RPA引物比一般PCR引物長(zhǎng),引物過(guò)短會(huì)影響擴(kuò)增速度和檢測(cè)靈敏度。
總結(jié)
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