1）造成空載多的原因可能是連接做的不好，導致載體自連，轉化之后大部分都是空載。解決方法：控制好載體和PCR產物的比例，PCR產物要過量，這樣能減少自連的情況。在轉化過程中用藍白斑顯色，能直接看出克隆中是否帶有插入片段，即使是陽性克隆，也最好做個PCR驗證，確認插入片段符合目標長度。2）測到的不是目標產物，那就是非特異性擴增的產物，可以嘗試提高退火溫度，增加引物和模板配對的特異性。16S擴增的片段中這種情況一般是比較少的。3）建議用16S高通量測序替代克隆文庫的做法，高效經濟。

空載，一個是沒有片段插入。一個是培養過程中片段丟失。第二種不需特殊條件培養一般發生的可能性比較小。PCR鑒定易受外界環境條件影響，一般建議使用酶切鑒定。假如酶切鑒定沒有問題那您可以使用擴增引物測序或者目的片段上引物進行測序，如若有插入片段可以得到測序結果，如若無片段結果為模板與引物不結合.這樣可以排除您實驗問題.如您懷疑測序問題可以進行驗證，驗證方法一般為：取您的原始菌液重新接菌提取質粒進行測序反應，結果一致將收取兩次費用，結果不一致將收取正確費用

總結

以上是生活随笔為你收集整理的16SDNA空载如何解决？的全部內容，希望文章能夠幫你解決所遇到的問題。

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