RNA测序可靠性如何?
生活随笔
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RNA测序可靠性如何?
小編覺得挺不錯(cuò)的,現(xiàn)在分享給大家,幫大家做個(gè)參考.
RNA測(cè)序也就是所謂的RNA-seq,通常指的是轉(zhuǎn)錄組測(cè)序,只測(cè)細(xì)胞中的轉(zhuǎn)錄本,只有基因組中被轉(zhuǎn)錄出來的那部分能測(cè)到,通常用于尋找差異表達(dá)基因以及發(fā)現(xiàn)新基因。DNA測(cè)序是測(cè)基因組,不管轉(zhuǎn)錄不轉(zhuǎn)錄,通常用于基因組組裝,重測(cè)序進(jìn)行基因分型等。相對(duì)而言,RNA測(cè)序影響準(zhǔn)確度的因素要多一些。
DNA測(cè)序是將RNA反轉(zhuǎn)錄成DNA然后測(cè)序,在反轉(zhuǎn)錄的過程中會(huì)存在一定小概率的錯(cuò)配、缺失等。 轉(zhuǎn)錄組測(cè)序主要通過高通量測(cè)序研究特定組織或細(xì)胞在某個(gè)時(shí)期轉(zhuǎn)錄出來的mRNA。
最近,由美國(guó)FDA牽頭的測(cè)序質(zhì)量控制(SEQC)項(xiàng)目對(duì)RNA測(cè)序的準(zhǔn)確性、可重現(xiàn)性和信息含量進(jìn)行了綜合性評(píng)估,并將初步調(diào)查結(jié)果發(fā)表在近日的Nature Biotechnology雜志上。研究人員發(fā)現(xiàn),所有測(cè)序深度都會(huì)出現(xiàn)未注釋的外顯子-外顯子連接區(qū)域,其中80%以上都得到了qPCR的驗(yàn)證。用RNA測(cè)序檢測(cè)相對(duì)表達(dá)可以得到準(zhǔn)確且可重復(fù)的結(jié)果,但RNA測(cè)序和芯片都不能提供精確的絕對(duì)測(cè)量,而且研究用到的平臺(tái)都存在基因特異性的偏好,包括qPCR。數(shù)據(jù)分析的算法也會(huì)對(duì)RNA測(cè)序產(chǎn)生很大影響,不同算法生成的轉(zhuǎn)錄本數(shù)據(jù)差異很大。
整體來說還是可靠的,雖說會(huì)有些許錯(cuò)配但是不會(huì)太影響。如果與DNA測(cè)序相比,還是有所不如的~
DNA測(cè)序是將RNA反轉(zhuǎn)錄成DNA然后測(cè)序,在反轉(zhuǎn)錄的過程中會(huì)存在一定小概率的錯(cuò)配、缺失等。 轉(zhuǎn)錄組測(cè)序主要通過高通量測(cè)序研究特定組織或細(xì)胞在某個(gè)時(shí)期轉(zhuǎn)錄出來的mRNA。
最近,由美國(guó)FDA牽頭的測(cè)序質(zhì)量控制(SEQC)項(xiàng)目對(duì)RNA測(cè)序的準(zhǔn)確性、可重現(xiàn)性和信息含量進(jìn)行了綜合性評(píng)估,并將初步調(diào)查結(jié)果發(fā)表在近日的Nature Biotechnology雜志上。研究人員發(fā)現(xiàn),所有測(cè)序深度都會(huì)出現(xiàn)未注釋的外顯子-外顯子連接區(qū)域,其中80%以上都得到了qPCR的驗(yàn)證。用RNA測(cè)序檢測(cè)相對(duì)表達(dá)可以得到準(zhǔn)確且可重復(fù)的結(jié)果,但RNA測(cè)序和芯片都不能提供精確的絕對(duì)測(cè)量,而且研究用到的平臺(tái)都存在基因特異性的偏好,包括qPCR。數(shù)據(jù)分析的算法也會(huì)對(duì)RNA測(cè)序產(chǎn)生很大影響,不同算法生成的轉(zhuǎn)錄本數(shù)據(jù)差異很大。
整體來說還是可靠的,雖說會(huì)有些許錯(cuò)配但是不會(huì)太影響。如果與DNA測(cè)序相比,還是有所不如的~
總結(jié)
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