樓上已經(jīng)把原因都說的很清楚了，針對可能造成PCR假陽性的實(shí)驗(yàn)操作，我們可以從以下幾方面避免：1.隔離不同操作區(qū)。PCR反應(yīng)準(zhǔn)備最好應(yīng)在裝有紫外燈的超凈臺(tái)內(nèi)進(jìn)行，除了操作分區(qū)外，還應(yīng)注意操作器材的專用。2.分裝試劑。PCR用的去離子水和緩沖液均應(yīng)高壓處理。3.嚴(yán)格實(shí)驗(yàn)操作。戴一次性手套操作，避免反應(yīng)液的飛濺，用一次性吸頭，吸頭不要暴露于空氣中，防止產(chǎn)物氣溶膠的污染。4.最后加樣品DNA，加入DNA后蓋緊EP管。5. 在排除污染的前提下，最好的解決空白對照組中出現(xiàn)“假陽性”的辦法就是把引物和酶的含量降到盡可能低，同時(shí)減少反應(yīng)循環(huán)次數(shù)（但在保證陽性對照組能夠出現(xiàn)條帶的前提下）；實(shí)驗(yàn)器材及試劑最好全部用進(jìn)口的。

(1)若是對照組，即無菌水空出現(xiàn)假陽性。建議加完9ul的mix后，先加水后加樣品。避免樣品濃度過高飛濺到移液槍中，從而在加水的時(shí)候進(jìn)入到孔中。(2)稀釋標(biāo)準(zhǔn)品時(shí)所用的無菌水應(yīng)和PCR時(shí)使用的無菌水分開，避免標(biāo)準(zhǔn)品因濃度過高進(jìn)入移液器。(3)提取樣品的操作區(qū)應(yīng)和PCR的操作區(qū)分開。提取樣品時(shí)使用的移液器、手套等不能帶入PCR操作區(qū)。

用PCR方法檢測轉(zhuǎn)基因成分時(shí)，經(jīng)常出現(xiàn)假陽性、假陰性、非特異性擴(kuò)增和涂抹帶。尤其是假陽性和假陰性可使檢測結(jié)果得出錯(cuò)誤結(jié)論，有時(shí)可造成嚴(yán)重后果。造成假陽性的原因1. 樣品間交叉污染：樣本污染主要有收集樣本的容器被污染，或樣本放置時(shí)，由于密封不嚴(yán)溢于容器外，或容器外粘有樣本而造成相互間交叉污染；樣本核酸模板在提取過程中，由于吸樣槍污染導(dǎo)致標(biāo)本 間污染；2. PCR試劑的污染：主要是由于在PCR試劑配制過程中，由于加樣槍、容器、雙蒸水及其它溶液 被PCR核酸模板污染。3. PCR擴(kuò)增產(chǎn)物污染：這是PCR反應(yīng)中最主要最常見的污染問題。因?yàn)镻CR產(chǎn)物拷貝量大(一般為1013拷貝/ml)，遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于PCR檢測數(shù)個(gè)拷貝的極限，所以極微量的PCR產(chǎn)物污染，就可形成假陽性。 4. 氣溶膠污染：在空氣與液體面摩 擦?xí)r就可形成氣溶膠，在操作時(shí)比較劇烈地?fù)u動(dòng)反應(yīng)管，開蓋時(shí)、吸樣時(shí)及污染進(jìn)樣槍的反復(fù)吸樣都可形成氣溶膠而污染。據(jù)計(jì)算一個(gè)氣溶膠顆粒可含48000拷貝，因而由 其造成的污染是一個(gè)值得特別重視的問題。5. 實(shí)驗(yàn)室中克隆質(zhì)粒的污染：由于克隆質(zhì)粒在單位容積內(nèi)含量相當(dāng)高，另外在純化過程中需用較多的用具及試劑，而且在活細(xì)胞內(nèi)的質(zhì)粒，由于活細(xì)胞的生長繁殖的簡便性及具有很強(qiáng)的生命力，其污染可 能性也很大。在分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室及某些用克隆質(zhì)粒做陽性對照的檢驗(yàn)室，這個(gè)問題比較常見。

總結(jié)

以上是生活随笔為你收集整理的PCR过程出现假阳性，原因有哪些呢？该如何杜绝PCR出现假阳性呢？的全部內(nèi)容，希望文章能夠幫你解決所遇到的問題。

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